Пояснение.

Гипотеза, предполагающая, что сходство некоторых мух с пчёлами защищает их от врагов, проверяется экспериментально

Ответ: 2

Можно ли считать простым совпадением то, что эти мухи отличаются от своих близких родичей-комнатных мух-и похожи на неродственных им пчел? Современные биологи усомнятся в этом и выдвинут гипотезу, что окраска этих мух возникла в процессе эволюции, поскольку сходство с пчелами давало им какое-то преимущество (изучением эволюции мы займемся в гл. 2). В чем может заключаться это преимущество?

Для того чтобы ответить на такой вопрос, нужны какие-то идеи или гипотезы, которые позволят объяснить сделанные наблюдения. Так, можно предположить, что сходство с пчелами защищает мух от поедания хищниками или же что оно позволяет мухам, обманув пчел, проникнуть в улей и полакомиться медом.

Следующий шаг состоит в том, чтобы разработать и провести эксперименты, которые позволят проверить выдвинутые гипотезы. Некоторые гипотезы для науки бесполезны, потому что их нельзя проверить. Например, гипотеза о том, что «хищники принимают безобидных мух за опасных пчел», не поддается проверке, так как вы не можете узнать, о чем думает то или иное животное. Но даже если гипотезу можно проверить, это обычно не удается сделать непосредственно; надо прежде придумать какое-нибудь вытекающее из нее и поддающееся проверке предсказание.

Допустим, что вы на основе своей первой гипотезы (о том, что окраска мухи защищает ее от хищников) делаете следующее предсказание: если данный хищник был ужален пчелами и научился не трогать их, то он не станет нападать на муху, которая выглядит как пчела. Это предсказание можно проверить.

Для проведения соответствующего эксперимента нужен хищник, питающийся насекомыми. Таким хищником может быть, например, жаба, которая ловит насекомых, летающих или ползающих поблизости от нее. Если в садок с «неопытной» жабой, ранее не встречавшейся с пчелами, выпустить этих насекомых, то она поймает несколько штук, поймет, что они жалят, и откажется от дальнейшей охоты. Если затем, поместив в садок муху, имеющую полосатую, черную с желтым, окраску, мы убедимся, что жаба откажется от этой мухи, то, следовательно, наша гипотеза, согласно которой сходство мухи с пчелой спасает ее от хищников, подтверждается.

Но, быть может, пчелы здесь совсем ни при чем. Быть может, жабы просто не едят полосатых мух. Чтобы проверить это, придется использовать еще одну «неопытную» жабу. Если окажется, что жаба охотно пожирает мух в черную и желтую полоску, то, значит, вы получили дополнительное подтверждение гипотезы о том, что преимущество полосатого наряда мухи объясняется его сходством с окраской пчелы.

Настоящий научный эксперимент должен непременно сопровождаться контрольным экспериментом, который отличался бы от основного эксперимента одним (и только одним) фактором. В рассматриваемом здесь случае необходимо, чтобы обе используемые жабы практически не отличались друг от друга, т.е. принадлежали к одному виду, были одного пола, одного возраста и имели одинаковые размеры. Их следует содержать в одинаковых садках, при одинаковых условиях освещения, температуры, влажности и т.п. Единственное различие между ними должно состоять в том, что одна жаба до того, как ей предложат муху, уже имела возможность столкнуться с пчелой, а другой жабе такой случай не представился. Без контрольного эксперимента может возникнуть мысль, что жаба отказывается от полосатых мух по какой- то иной, не учтенной нами причине, например потому, что она не голодна, вы же делаете ошибочное заключение, что дело здесь в сходстве с пчелами. (Фактически вы можете провести еще один контрольный эксперимент, предложив первой жабе безобидную комнатную муху после того, как она откажется от полосатой мухи; это позволит проверить, действительно ли жаба сыта.)

Итак, вы провели хорошо поставленный научный эксперимент. Какие выводы вы можете сделать? Вернемся снова к гипотезе: «сходство мухи с пчелами защищает ее от хищников». Удалось ли вам доказать это? Нет; вы всего лишь показали, что одна жаба отказалась от полосатой мухи после того, как она научилась отказываться от пчел, тогда как другая жаба, никогда не имевшая дела с пчелами, поедала полосатых мух.

Исследователи не принимают результаты эксперимента до тех пор, пока не убедятся в их воспроизводимости. Возможность многократного воспроизведения результатов позволяет избежать ошибок. Достоверность результатов можно повысить, если многократно повторить эксперимент, используя большое число жаб и в точности воспроизводя те же условия. Сколько следует использовать жаб? Чем больше, тем лучше, но было бы непрактично (и утомительно) проводить эксперимент на всех жабах земного шара. На самом деле существуют статистические методы, позволяющие определить, насколько «надежны» результаты при данной величине выборки.

Вы можете также подвергнуть проверке предсказание о том, что окраска мух отпугивает «знакомых с пчелами» хищников; для этого следует проделать дополнительные эксперименты, используя вместо жаб лягушек, птиц, ящериц и других хищников, питающихся насекомыми. Чем больше альтернативных гипотез вам удастся опровергнуть и чем большее число разных хищников откажется от полосатых мух после близкого знакомства с пчелами, тем убедительнее вы докажете правильность своей гипотезы.

Гипотеза, подтвержденная многочисленными и разнообразными данными, полученными в результате воспроизводимых экспериментов, обычно считается теорией и в конце концов рассматривается как научно установленный «факт».

Что такое центрифугирование? Для чего применяется метод? Термин "центрифугирование" означает разделение жидких либо твердых частиц вещества на различные фракции с помощью центробежных сил. Осуществляется такая сепарация субстанций благодаря использованию специальных аппаратов - центрифуг. В чем же заключается принцип метода?

Принцип центрифугирования

Рассмотрим более детально определение. Центрифугирование - это воздействие на вещества путем сверхскоростного вращения в специализированном аппарате. Главной частью любой центрифуги выступает ротор, который содержит гнезда для установки пробирок с материалом, что подлежит сепарации на отдельные фракции. Во время вращения ротора на повышенных скоростях в действие вступает Вещества, помещенные в пробирки, разделяются на различные субстанции согласно уровню плотности. Например, при центрифугировании образцов подземных вод отделяется жидкость и осаждаются содержащиеся в ней твердые частицы.

Автор метода

Впервые стало известно, что такое центрифугирование, после опытов, проведенных ученым А. Ф. Лебедевым. Метод был разработан исследователем с целью определения состава почвенных вод. Ранее в данных целях использовали отстаивание жидкости с последующим отделением от нее твердых образцов. Разработка метода центрифугирования позволила справляться с этой задачей гораздо быстрее. Благодаря такой сепарации возникла возможность для извлечения твердой доли веществ из жидкости в сухом виде на протяжении считаных минут.

Этапы центрифугирования

Дифференциальное центрифугирование начинается с отстаивания веществ, что подлежат исследованию. Такая обработка материала происходит в аппаратах-отстойниках. В ходе отстаивания частицы вещества разделяются под воздействием гравитации. Это позволяет подготовить субстанции к более качественной сепарации с помощью центробежных сил.

Далее вещества в пробирках подвергаются фильтрации. На этом этапе применяются так называемые перфорированные барабаны, что предназначаются для отделения жидких частиц от твердых. В ходе представленных мероприятий весь осадок остается на стенках центрифуги.

Преимущества метода

По сравнению с прочими методами, направленными на разделение отдельных субстанций, такими как фильтрование или отстаивание, центрифугирование дает возможность получать осадок с минимальным показателем влажности. Применение такого способа сепарации позволяет разделять тонкодисперсные суспензии. Результатом становится получение частиц размером в 5-10 мкм. Еще одним важным преимуществом центрифугирования выступает возможность его выполнения при помощи аппаратуры малых объемов и габаритов. Единственным недостатком метода выступает высокая энергоемкость приборов.

Центрифугирование в биологии

В биологии к сепарации веществ на отдельные субстанции прибегают при необходимости подготовки препаратов для исследования под микроскопом. Центрифугирование здесь производится на сложных устройствах - цитороторах. Такие аппараты помимо слотов для пробирок комплектуются держателями образцов, всевозможными предметными стеклами непростой конструкции. От устройства центрифуги при проведении исследований в биологии напрямую зависит качество получаемых материалов и, соответственно, количество полезной информации, которую можно почерпнуть из результатов анализа.

Центрифугирование в нефтеперерабатывающей промышленности

Метод центрифугирования незаменим при добыче нефти. Существуют углеводородные ископаемые, из которых не полностью выделяется вода при дистилляции. Центрифугирование дает возможность убрать лишнюю жидкость из состава нефти, повысив ее качество. В данном случае нефть растворяют в бензоле, затем нагревают до 60 о С, а затем подвергают воздействию центробежной силы. В завершение замеряют количество оставшейся воды в веществе и при необходимости повторяют процедуру.

Центрифугирование крови

Этот метод широко применяется для лечебных целей. В медицине он позволяет решать следующий ряд задач:

  1. Получение очищенных образцов крови для проведения плазмафереза. В данных целях в центрифуге отделяют форменные элементы крови от ее плазмы. Операция дает возможность избавить кровь от вирусов, избыточных антител, болезнетворных бактерий, токсинов.
  2. Подготовка крови для донорского переливания. После разделения телесной жидкости на отдельные фракции при помощи центрифугирования донору возвращают клетки крови, а плазма применяется для переливания либо замораживается в целях последующего использования.
  3. Выделение тромбоцитарной массы. Субстанцию получают из Полученную массу используют в хирургических и гематологических отделениях медицинских учреждений, в неотложной терапии, операционных. Применение тромбоцитарной массы в медицине дает возможность улучшить свертываемость крови у пострадавших.
  4. Синтез эритроцитарной массы. Центрифугирование клеток крови происходит путем деликатной сепарации ее фракций согласно специальной методике. Готовую массу, богатую эритроцитами, используют для переливания при кровопотерях, операциях. Эритроцитарная масса нередко применяется в целях лечения анемии, прочих заболеваний крови системного характера.

В современной медицинской практике применяется немало приборов нового поколения, которые дают возможность разгонять вращающийся барабан до определенной скорости и останавливать его в определенный момент. Это позволяет более точно разделять кровь на эритроциты, тромбоциты, плазму, сыворотку и сгустки. Аналогичным способом исследуются прочие телесные жидкости, в частности сепарируются вещества в составе мочи.

Центрифуги: основные типы

Мы разобрались, что такое центрифугирование. Теперь давайте выясним, какие аппараты применяются для реализации метода. Центрифуги бывают закрытыми и открытыми, с механическим или ручным приводом. Основной рабочей частью ручных открытых приборов выступает вращающаяся ось, расположенная вертикально. В ее верхней части перпендикулярно закреплена планка, где располагаются подвижные металлические гильзы. В них помещаются специальные пробирки, зауженные в нижней части. На дно гильз укладывают вату, что позволяет избежать повреждения стеклянной пробирки при соприкосновении с металлом. Далее аппарат приводят в движение. По истечении некоторого времени происходит отделение жидкости от твердых взвешенных частиц. После этого ручную центрифугу останавливают. На дне пробирок концентрируется плотный, твердый осадок. Над ним находится жидкая часть вещества.

Механические центрифуги закрытого типа обладают большим количеством гильз для размещения пробирок. Такие приборы более удобны по сравнению с ручными. Их роторы приводятся в движение мощными электромоторами и способны разгоняться до 3000 оборотов в минуту. Это дает возможность осуществлять более качественную сепарацию жидких субстанций от твердых.

Особенности подготовки пробирок при центрифугировании

Пробирки, что применяются для центрифугирования, должны быть наполнены исследуемым материалом идентичной массы. Поэтому для измерений здесь применяются специальные высокоточные весы. Когда требуется уравновешивание многочисленных пробирок в центрифуге, прибегают к следующему приему. Взвесив пару стеклянных емкостей и добившись одинаковой массы, одну из них оставляют в качестве эталона. Последующие пробирки уравновешивают с этим образцом, прежде чем поместить в аппарат. Такой прием существенно ускоряет работу при необходимости подготовки к центрифугированию целой серии пробирок.

Стоит заметить, что в пробирки никогда не помещают слишком много исследуемой субстанции. Стеклянные емкости наполняют таким образом, чтобы расстояние до края составляло не менее 10 мм. Иначе вещество будет выливаться из пробирки под воздействием центробежной силы.

Сверхцентрифуги

Для разделения составляющих чрезвычайно тонких суспензий недостаточно применения обычных ручных либо механических центрифуг. В данном случае требуется более внушительное воздействие на вещества со стороны центробежных сил. При реализации таких процессов применяются сверхцентрифуги.

Аппараты представленного плана оснащаются глухим барабаном в виде трубки незначительного диаметра - не более 240 мм. Длина такого барабана значительно превышает его сечение, что дает возможность в значительной степени повысить количество оборотов и создать мощнейшую центробежную силу.

В сверхцентрифуге исследуемое вещество поступает внутрь барабана, движется по трубке и ударяется о специальные отражатели, что отбрасывают материал на стенки прибора. Здесь же имеются камеры, предназначенные для раздельного вывода легких и тяжелых жидкостей.

К достоинствам сверхцентрифуг относятся:

  • абсолютная герметичность;
  • высочайшая интенсивность сепарации веществ;
  • компактные размеры;
  • возможность разделения субстанций на молекулярном уровне.

В заключение

Вот мы и выяснили, что такое центрифугирование. В настоящее время метод находит свое применение при необходимости выделения осадков растворов, очищения жидкостей, разделения компонентов биологически активных и химических веществ. Для сепарации субстанций на молекулярном уровне применяются ультрацентрифуги. Метод центрифугирования активно используется в химической, нефтяной, атомной, пищевой промышленности, а также в медицине.

Метод дифференциального центрифугированияМетод дифференциального
центрифугирования используется для
фракционирования клеток, т. е. расслоения их
содержимого на фракции в зависимости от удельного
веса различных органоидов и клеточных включений.
В результате центрифугирования компоненты
клеток выпадают в осадок из раствора, располагаясь
в соответствии со своей плотностью. Более плотные
структуры осаждаются при более низких скоростях
центрифугирования, а менее плотные – при высоких
скоростях.

1. Метод, с помощью которого органеллы выделяют из клеток, называют
фракционированием. Этот метод оказался очень плодотворным, дав
биохимикам возможность выделять разные органеллы клетки в
относительно чистом виде. Он позволяет, кроме того, определять
химический состав органелл и содержащиеся в них ферменты и на
основании получаемых данных делать выводы об их функциях в
клетке. В качестве первого шага клетки разрушают путем
гомогенизации в какой-нибудь подходящей среде, которая
обеспечивает сохранность органелл и предотвращает их агрегацию.
2. На следующем этапе клеточный гомогенат подвергают ряду
центрифугирований, скорость и продолжительность которых всякий раз
возрастает; этот процесс называется дифференциальным
центрифугированием. Разные органеллы клетки осаждаются на дне
центрифужных пробирок при различных скоростях центрифугирования,
что зависит от размеров, плотности и формы органелл.

Этапы дифференциального центрифугирования:

3. Образующийся осадок можно отобрать и
исследовать. Быстрее всех осаждаются такие
крупные и плотные структуры, как ядра, а для
осаждения более мелких и менее плотных
структур, таких, как пузырьки
эндоплазматического ретикулума, требуются
более высокие скорости и более длительное
время. Поэтому при низких скоростях
центрифугирования ядра осаждаются, а
другие клеточные органеллы остаются в
суспензии.

Этапы дифференциального центрифугирования:

4. При центрифугировании раньше всего и при
небольших (1-3 тыс. g)ускорениях осядут ядра и
неразрушенные клетки, при 15-30 тыс. g осядут
крупные частицы, макросомы, состоящие из
митохондрий, мелких пластид, пероксисом, лизосом
и др., при 50 тыс. g осядут микросомы, фрагменты
вакуолярной системы клетки.
Осадки можно исследовать с помощью
электронного микроскопа, чтобы определить чистоту
полученных фракций. Все фракции до некоторой
степени загрязнены другими органеллами. Если тем
не менее удается добиться достаточной чистоты
фракций, то их подвергают затем биохимическому
анализу, чтобы определить химический состав и
ферментативную активность выделенных органелл.

Центрифугирование в градиенте плотности

Сравнительно недавно был создан другой метод
фракционирования клеток – центрифугирование
в градиенте плотности; при этом
центрифугирование производят в пробирке, в
которой предварительно наслаивают друг на друга
растворы сахарозы все возрастающей концентрации,
а следовательно, и возрастающей плотности. При
центрифугировании содержащиеся в гомогенате
органеллы располагаются в центрифужной пробирке
на тех уровнях, на которых находятся растворы
сахарозы, соответствующие им по плотности.


Лейбих (циг. по С. Граник, 1962) установил, что в меристематических тканях железо необходимо для синтеза железосодержащих ферментов митохондрий; 82% его сосредоточено в хлоропластах, в ядрах найдены только следы. В то же время А.Ф. Агафонова, Н.С. Чаплыгина (1962), исследуя поглощение железа растениями и его распределение внутри клетки, приходят к выводу, что в клеточных ядрах паренхимы листьев кукурузы содержалось больше железа, чем в хлоропластах и структурах митохондриального типа. Содержание железа в последних было ниже, чем в хлоропластах.
В работе Дж. Скока (1962) приводятся некоторые данные о локализации бора в клеточных структурах. Автор указывает, что митохондрии и микросомы содержат меньше бора, чем ядра, пластиды и надосадочная жидкость. Для осуществления различных клеточных функций используется бор, содержащийся в диализируемой фракции надосадочной жидкости.
Мы совместно с З.М. Климовицкой, Л.Д. Лейденской и Э.В. Рудаковой в 1961-1953 гг. изучали локализацию микроэлементов марганца, молибдена и цинка в клеточных структурах растений, а также содержание микроэлементов в связи с онтогенезом растений. Был использован метод дифференциалы ого центрифугирования, дающий возможность выделить цитоплазму и органоиды клетки: ядра, хлоропласта, митохондрии. Мы придерживались методики выделения клеточных структур, предложенной Н.С. Сисакяном, И.М. Мосоловой (1961-1962).
В 1961 г. работу проводили на центрифуге с охлаждением и общей разрешающей способностью 30 000 g. Из гомогенатов листьев сахарной свеклы (сорт Верхнячская 020) в 0,35 M растворе сахарозы при 2500 g выделены крупные фрагменты клеток, при 4500 g - хлоропласта, при 17 000 g - митохондрии. Выделенные фракции сжигали. В полученной золе определяли марганец. Содержание его выражали в миллиграммах в пересчете на ту или иную фракцию, выделенную из 1 кг сырого вещества растении. Так, в крупных фрагментах клеток содержалось 20,88 мг/кг марганца, или 44,5%; в хлоропластах - 3,46, или 7,5; в митохондриях - 2,05, или 4,3; в незеленых цитоплазменных структурах - 20,43 мг/кг, или 43,7%. Препараты хлоропластов идентифицировали по их характерной люминесценции.
Максимальное количество марганца содержалось в незеленых цитоплазменных структурах и крупных фрагментах клеток. При пересчете на содержание марганца в золе каждой фракции максимальное количество его отмечено для фракции хлоропластов и митохондрий. В крупных фрагментах клеток содержалось 325,1 мг марганца на 100 г золы, или 16,3%; в хлоропластах - 823,9, или 42,5; в митохондриях - 500, или 25,1; в незеленых цитоплазменных структурах - 321 мг, или 16,1%, марганца.
В 1962 г. нами была принята следующая методика работы по изучению содержания марганца, молибдена и цинка в клеточных структурах листьев конских бобов и сахарной свеклы. Бобы (сорт Херц-Фрея) и сахарную свеклу (сорт Рамонская 04) выращивали на стационаре опытного хозяйства Института физиологии растений АН УССР на лугово-черноземной оподзоленной почве по фону NPK с добавлением марганца, молибдена и цинка. В начале, середине и конце вегетации мы брали навески листьев (30 г сырого вещества), затем их растирали на льду с 40 мл 0,5 M сахарозы и 10 мл фосфатного буфера (по Серенсену); pH среды 7,1. Полученные гомогенаты подвергали дифференциальному центрифугированию на центрифуге ТМ-14, разрешающая способность которой 20 000 g. Вначале из гомогенатов удаляли крупные фрагменты клеток. Затем на центрифуге при 1500 и 3000 g в течение 10 мин выделяли более мелкие фрагменты (осколки) клеток. Отмечено, что при 3000 g в течение 10 мин оседали ядра. Хлоропласты выделяли в течение 15 мин при 6000 - 10 000 g, а при 14 000 g - митохондрии. Выделенные фракции подвергали повторному центрифугированию с 2 мл сахарозы в течение 10-15 мин при соответствующих для каждой фракции значениях оборотов. Полученные фракции сжигали в муфеле, а в их золе определяли марганец, молибден, цинк. В оставшейся надосадочной жидкости также определяли содержание этих микроэлементов.
Фракции подвергали гистологическому анализу. Под микроскопом просматривали клеточные оболочки, ядра, хлоропласты. Митохондрии нам не удалось идентифицировать. У листьев бобов оказались очень тяжелые форменные элементы; это были преимущественно хлоропласты, которые при 3000-6000 g почти полностью осаждались. Надосадочная жидкость была прозрачной. У сахарной свеклы хлоропласты лучше всего осаждались при 6000-10 000 g. Совершенно прозрачной надосадочной жидкости не удавалось получить даже при 14 000 g. Этим, очевидно, объясняется отсутствие единой методики выделения клеточных структур. Разная степень оседания клеточных структур требует дифференцированных методик их выделения с учетом биологических особенностей каждой культуры.
Количество микроэлементов в клеточных структурах, выделенных методом дифференциального центрифугирования, рассчитывали в миллиграммах на 1 кг сырого вещества навески, в процентах от общего содержания и в миллиграммах на 100 г золы каждой фракции.
Из клеточных структур листьев сахарной свеклы максимальное количество марганца (при пересчете на фракцию, выделенную из 1 кг сырого вещества) сосредоточивается в надосадочной жидкости, т. е. в цитоплазме; в крупных фрагментах клеток (хлоропластах, ядрах, митохондриях) он содержится в убывающем порядке. К середине вегетации количество марганца в листьях сахарной свеклы (табл. 45) возрастает за счет увеличения содержания его в крупных фрагментах клеток и надосадочной жидкости. В органоидах клетки (ядрах, хлоропластах, митохондриях) оно остается довольно постоянным в течение всего периода вегетации.

Мы как раз начали применять еще новый в то время метод дифференциального центрифугирования. Он сводится к тому, что клетки разрушают в гомогенизаторе, а затем центрифугируют при последовательно возрастающих скоростях, после чего получают несколько фракций, состоящих из разных органелл (рис. 1.) Выделенные таким путем органеллы все еще сохраняют многие из своих функциональных свойств, которые можно затем изучить посредством биохимических методов. Наша задача состояла в том, чтобы установить местонахождение в этих фракциях некоторых ферментов, участвующих в обмене углеводов в печени крысы, и тем самым выяснить, с какими клеточными структурами связаны эти ферменты. Как правило, мы проверяли сначала гомогенат клеток на присутствие данного фермента, а затем искали его во фракциях. Среди прочих ферментов мы работали с так называемой кислой фосфатазой. Этот фермент, отщепляющий неорганический фосфат от ряда фосфорных эфиров, не связан непосредственно с углеводным обменом. В основном он служил нам в качестве контроля.

К нашему удивлению, активность кислой фосфатазы в гомогенате была в 10 раз меньше той величины, которую следовало ожидать на основании предыдущих анализов препаратов, подвергнутых более основательному разрушению в смесителе Уоринга. Суммарная активность всех фракций хотя и превышала вдвое активность гомогената, но все-таки была в 5 раз меньше ожидаемой величины. Когда через пять дней мы повторили определения на тех же фракциях (которые хранили все время в холодильнике), то оказалось, что активность фермента значительно возросла во всех отдельных фракциях, а особенно во фракции, содержащей митохондрии. Теперь суммарная активность уже достигла ожидаемой величины.

К счастью, мы устояли перед искушением отбросить первую серию данных как результат технической ошибки. Мы провели несколько дополнительных опытов и быстро получили ключ к разгадке тайны. В живых клетках фермент в основном (или даже полностью) заключен внутри небольших мешочкоподобных частиц. Поверхностная мембрана этихчастиц не только способна удерживать фермент внутри частицы, но и препятствует проникновению извне тех мелких молекул фосфорных эфиров, с которыми мы работали. Активность, измеренная в наших опытах, характеризовала лишь ту небольшую часть фермента, которая либо находилась в клетке в свободном состоянии, либо освободилась из частиц, поврежденных в ходе опыта. Смеситель Уоринга практически разрушает все частицы; при более мягкой обработке в гомогенизаторе, которую мы применили в наших исследованиях, разрушается лишь около 10% частиц. Этим и объясняется низкая первоначальная активность фермента в гомогенате. Дальнейшее фракционирование приводит к возрастанию суммарной активности во фракциях еще на 10%. Остальная часть фермента освобождается в результате старения частиц при хранении их в течение пяти дней в холодильнике.

TBegin-->TEnd-->

Рис. 1. Дифференциальное центрифугирование позволяет разделить клетки на фракции, состоящие из различных клеточных компонентов. Быстрое механическое вращение пестика разрушает клетки, вызывая освобождение их содержимого в окружающую среду. Гомогенат подвергается последовательному центрифугированию при разных скоростях. Метод, разработанный В. Шнайдером, включает этапы 1—8. Автор и его сотрудники ввели этапы 9 и 10. Фракция митохондрий (6 этап) осаждается после центрифугирования при 25 000 g в течение 10 мин. Числа, характеризующие градиент плотности сахарозы, показывают удельный вес (г/см3).