Сведения о скрининге на злоупотребление психоактивными веществами (ПВЗ) и его диагностике обобщены в таблице ниже.

- Анализы мочи для диагностики отравления психоактивными веществами (ПВЗ) . Анализы мочи на психоактивные вещества (ПВЗ) включают два типа процедур: скрининговые (первичные) и окончательные (подтверждающие).

Для скрининга обычно используют быстрые и недорогие методы. Окончательные анализы призваны хотя бы частично отсеять ложноположительные результаты.

- Проверка на рабочем месте . Обязательные нормативы Федеральных программ по наркологической проверке на рабочих местах требуют применения для скрининга иммуноаналитических методов, а для подтверждения результатов - газовой хроматографии или масс-спектрометрии.

- Скрининговые анализы . Показания. Вескими основаниями для проведения скрининга на психоактивные вещества (ПВЗ) являются заметное ухудшение или отклонения в поведении, настроении, рассудительности и мышлении (галлюцинации, паранойя, шизофрения) у молодого человека; ухудшение успеваемости или прогулы учебы/работы; антиобщественное поведение, например хроническая ложь, воровство и неуважение чужих прав; неоднократное насилие в отношении людей или посягательства на чужую собственность; серьезные депрессивные или биполярные расстройства настроения; попытки самоубийства; необъяснимое утомление у человека; хронический вазомоторный ринит; припадки или кома неясной этиологии; недавнее окончание лечения по поводу зависимости от марихуаны, кокаина или опиатов.

Взятие проб . Непрерывный контроль. Путь пробы мочи для анализа на психоактивные вещества (ПВЗ) необходимо документировать с момента ее забора на протяжении всей транспортировки в этикетированной запечатанной таре и во время анализа. Если пробу берут без наблюдения, необходимо сразу же зарегистрировать рН, температуру и плотность. У свежей мочи температура должна составлять 33-36 °С, а рН - от 4,6 до 8,0.

Хранение . Пробу мочи можно хранить при комнатной температуре до 3 сут или в холодильнике до 1 нед, а для длительного хранения (недели - месяцы) лучше всего замораживать при температуре -6,6 °С или ниже. Если планируется анализ на ЛСД, мочу надо держать в темном месте.

Наблюдение после анализа . Если проба оказалась положительной, окончательные выводы следует делать, исходя из результатов дополнительных периодических или нерегулярных анализов.

Пороговый уровень . Пороговый уровень устанавливается изготовителем аналитического оборудования и показывает, при какой выявленной концентрации вещества высока статистическая вероятность того, что результат не является ложноположительным. Результаты ниже стандартного порогового уровня считаются отрицательными, даже если более чувствительный метод или иной пороговый уровень отнес бы их к положительным.

Пороговый уровень устанавливают с учетом чувствительности конкретного аналитического метода, перекрестных реакций, накопленного опыта и методики, выбранной для подтверждения результатов (обычно это газовая хроматография - масс-спектрометрия).


- Окончательные анализы . Стандартным методом окончательного токсикологического анализа считается газовая хроматография - масс-спектрометрия (ГХ/МС). Она способна определить большинство ПВЗ и их метаболиты с чувствительностью до нескольких нанограммов на миллилитр. Положительный результат иммуноанализа подтверждают самыми точными методами ГХ/МС, включающими ионизацию путем электронной бомбардировки, трехионный мониторинг и определение ионных соотношений.

Если речь не идет о судебно-медицинской экспертизе, результаты тонкослойной хроматографии (TCX) можно подтверждать жидкостной хроматографией высокого разрешения (ЖХВР) или газожидкостной хроматографией (ГЖХ). ГЖХ полезна для выявления в моче и крови алкоголя и летучих вдыхаемых веществ. При ЖХВР ультрафиолетовый, флюоресцентный или электрохимический детектор, установленный на выходе из колонки, позволяет измерять концентрации психоактивных веществ (ПВЖ) с большими чувствительностью и специфичностью, чем ТСХ. При ГЖХ также применяют разные типы детекторов, например азотно-фосфорный.

Перекрестно реагирующие вещества. Широко распространенные вещества, дающие перекрестные реакции при скрининговом иммуноанализе, приведены в таблице ниже.


- Время получения результатов . Время выявления психоактивными веществами (ПВЗ) в моче при использовании их пороговых уровней указано в таблице ниже. Пределы обнаружения обычных психоактивными веществами (ПВЗ) приведены в таблице ниже. Проблемы, с которыми приходится сталкиваться при анализе проб мочи у работников промышленности, источники ошибок при таких исследованиях обобщены в ниже. Способы фальсификации сдаваемых на анализ проб рассмотрены в следующей отдельной статье на сайте.

Пробы мочи, направляемые на анализ психоактивных веществ (ПВЗ), необходимо проверять на . Если его уровень ниже 4,0 ммоль/л, отрицательные результаты по психоактивными веществами (ПВЗ) могут быть недействительными.


1. Определите, нужен ли скрининг. Оправдан ли он интересами здравоохранения или производственными проблемами, связанными со злоупотреблением психоактивными веществами?

2. Определите цель скрининга. Должен ли анализ выявлять только официально запрещенные средства или будет частью более общей программы по борьбе со злоупотреблением психоактивными веществами, включая алкоголь, безрецептурные или рецептурные лекарства?

3. Определите необходимый тип анализа. Какие вещества он должен выявить?

4. Определите частоту скрининга. Проводить ли его при приеме на работу, периодически или в связи с несчастными случаями и авариями на производстве? В настоящее время, по-видимому, юридически почти решен вопрос о необходимости проведения скрининга мочи при приеме на работу; однако остаются существенные проблемы, касающиеся рандомизированного периодического скрининга.

5. Выберите подходящую лабораторию, способную обеспечить бесперебойное обслуживание и проведение окончательных (подтверждающих) анализов при положительных результатах первичного скрининга.

6. Составьте протокол работы в случае положительных результатов анализа еще до внедрения программы скрининга. (Неразумно дожидаться результатов скрининга при приеме на работу, чтобы потом обсуждать, как поступить с кандидатом на место.)

7. Определите стоимость программы, учитывая возможные расходы на окончательные анализы.

8. Помните о не учтенных скринингом веществах, способных влиять на работоспособность, например об алкоголе, рецептурных или безрецептурных лекарствах.

9. Помните об ограничениях скрининга. Возможны ложноположительные результаты. В идеале скрининг должен сочетаться с более широкой программой борьбы со злоупотреблением психоактивными средствами, в том числе с просветительской работой среди служащих и руководителей предприятия.

10. Будьте реалистами. Скрининг не решает проблемы злоупотребления психоактивными веществами.

Источники ошибок при анализе мочи на вызывающие зависимость психоактивные вещества:

Подмена проб мочи проверяемым (мочой не употребляющего психоактивных веществ человека или яблочным соком)

Порча пробы путем разведения водой, хлоридом натрия, уксусом, нашатырным спиртом, гидрохлоритом натрия или мыльным раствором

Помехи, обусловленные применением отпускаемых без рецепта лекарств или потреблением пищевых продуктов, особенно при проверке на амфетамины (симпатомиметики) и опиаты

Ошибки, связанные со сбором или хранением проб (грязная посуда, неотфильтрованная мутная моча, хранение при комнатной температуре в течение 4 сут и более, действие яркого света (разрушает ЛСД)

Листовки

Синтетические поверхностно-активные вещества (СПАВ)

Компания СТАЙЛАБ предлагает тест-системы для определения синтетических поверхностно-активных веществ методом иммуноферментного анализа (ИФА). В состав наборов входят все необходимые реагенты, включая стандартные растворы.

Alkylphenol (AP) (алкилфенолы), ИФА.

Спецификация: Alkylphenol Plate kit (AP), L53000401-096
Формат:
Стандарты: 0 / 5 / 20 / 100 / 500 мкг/л
Пробоподготовка: Вода:
Затраты времени: Анализ: 2,5 часа
Предел обнаружения: 5 мкг/л

Alkyl Ethoxylate (AE) (алкилэтоксилат), ИФА.

Спецификация: Alkyl Ethoxylate Plate kit (AE), L52000401-096
Формат: Стрипованный планшет, 96 лунок (12 стрипов по 8 лунок)
Стандарты: 0 / 0,02 / 0,05 / 0,1 / 0,4 мг/л
Пробоподготовка: Вода: фильтрование, очистка методом твердофазной экстракции
Затраты времени: Анализ: 2,5 часа
Предел обнаружения: 0,02 мг/л

Alkylphenol Ethoxylate (APE) (алкилфенолэтоксилат), ИФА.

Спецификация: Alkylphenol Ethoxylate (APE), L51000401-096 или L51000401-020
Формат: Стрипованный планшет, 96 опр. или пробирки, 20 опр.
Стандарты: 0 / 0,02 / 0,05 / 0,1 / 0,4 / 1,0 мг/л
Пробоподготовка: Вода: фильтрование, очистка методом твердофазной экстракции
Затраты времени: Анализ: 2,5 часа
Предел обнаружения: 0,02 мг/л

Linear Alkylbenzene Sulfonate (LAS) (линейные алкилбензолсульфонаты), ИФА.

Синтетические поверхностно-активные вещества

Поверхностно-активные вещества (ПАВ), в том числе, синтетические (СПАВ) очень широко используются в различных сферах. Это основные действующие компоненты бытовых моющих средств, шампуней и мыла. ПАВ входят в состав косметики, лаков, красок и средств для борьбы с вредителями. Также их используют в производстве тканей, металлургической, нефтедобывающей, строительной, пищевой отраслях промышленности и в медицине. Объем производства СПАВ постоянно растет.

Такие разнообразные возможности для использования ПАВ определяются их свойствами. Эти вещества снижают поверхностное натяжение на поверхности раздела фаз, что позволяет им образовывать пленки, эмульсии, пену.

Эти способности ПАВ обусловлены строением их молекул. Молекулы большинства таких веществ состоят из двух частей - гидрофильной (водорастворимой) «головы» и гидрофобного (не растворяющегося в воде) «хвоста». Когда вещество с подобной структурой попадает в воду, оно самоорганизуется так, чтобы «головы» молекул находились в воде, а «хвосты» - вне ее. На поверхности воды образуются пленки, при больших концентрациях вещества получается эмульсия - взвесь мицелл («капель») вещества в растворителе.

Пленки отделяют водную среду от воздушной, тем самым препятствуя газообмену между ними и уменьшая испарение воды. Это приводит к гибели многих водных организмов от нехватки кислорода или избытка углекислого газа.

Если ПАВ оказываются в воде в большом количестве, их способность растворять жиры также может представлять опасность для живых организмов. ПАВ смывают жир с кожи млекопитающих и перьев птиц, что увеличивает смачивание их водой. Это приводит к гибели животных от переохлаждения. Вредят ПАВ и рыбам, разрушая слизь, которой покрыты их тела.

Продукты разложения некоторых ПАВ стимулируют рост водных растений. Когда питательные вещества, образовавшиеся при разложении ПАВ, заканчиваются, растения умирают, в водоем поступают продукты их гниения и в воде снижается содержание кислорода. Другие (ионогенные) ПАВ разрушают мембраны растительных клеток, что приводит к повреждениям и гибели растений.

Мицеллы ПАВ могут выступать концентраторами и переносчиками тех опасных веществ, которые плохо растворяются в воде, но хорошо в органических растворителях. Тем самым ПАВ облегчают проникновение в организмы животных токсичных веществ, например, тяжелых металлов, пестицидов, жирорастворимых ядов, усиливая их действие.

При контакте с кожей и слизистыми оболочками ПАВ могут вызывать аллергические реакции и раздражение. Некоторые ПАВ способны накапливаться в организмах, что приводит к нарушениям обмена веществ, работы почек, печени, иммунной и репродуктивной системы.

Присутствие ПАВ в окружающей среде и ее компонентах нежелательно. Предельно допустимые концентрации (ПДК) различных ПАВ в воде регламентируются гигиеническими нормативами:
ГН 2.1.5.1315-03 с дополнением ГН 2.1.5.2280-07.

Для анализа ПАВ используют сложные и дорогостоящие методики, требующие использования специального оборудования. Альтернативой им является метод иммуноферментного анализа (ИФА).

Литература

  1. «Химия и химики», № 1, 2011 г.
  2. Остроумов С. А. Биологические эффекты при воздействии поверхностно-активных веществ на организм, Макс-пресс, 2001

ПАВ (Поверхностно Активные Вещества) - это, как правило, химические вещества, которые содержатся в любом чистящем средстве, даже в обычном мыле. Как раз благодаря ПАВам чистящее средство чистит.

Для чего ПАВы нужны?

Проблема в том, что грязь, особенно жир, очень сложно смыть водой. Попробуйте помыть жирные руки водой. Вода будет стекать, не смывая жир. Молекулы воды не липнут к молекулам жира и не забирают их с собой. Стало быть, задача в том, чтобы прикрепить молекулы жира к молекулам воды. Именно это и делают ПАВы. Молекула ПАВ представляет собой сферу, один полюс которой - липофильный (соединяется с жирами), а другой - гидрофильный (вступает в связь с молекулами воды). То есть, одним концом частица ПАВ прикрепляется к частице жира, а другим концом - к частицам воды.

Как ПАВ влияют на наше здоровье?

Большая часть влаги человеческого тела имеет также жировую основу. Т.е. например защитный слой кожи (липиды - жиры, которые защищают кожу от попадания в организм различных бактерий) является жировой пленкой и естественно разрушается ПАВами. А зараза нападает на то место, которое наименее защищено, что конечно же вредно для здоровья человека. Специалисты утверждают, что после применения моющего средства защитный слой кожи должен успеть восстановиться в течение 4 часов до, как минимум 60%. Это установленные ГОСТом нормы гигиены. Однако далеко не все моющие средства обеспечивают такую восстановимость кожи. А обезжиренная и обезвоженная кожа быстрей стареет.

Кроме того, небиоразлагаемые ПАВы могут накапливаться в мозге, печени, сердце, жировых отложениях (особенно много) и продолжать разрушение организма длительное время. А поскольку без моющих средств практически никто не обходится, то ПАВы постоянно пополняются в нашем организме обеспечивая непрерывный вред телу. ПАВы также влияют на репродуктивную функцию у мужчин, аналогично радиоактивному излучению.

Проблема усугубляется тем, что наши очистные сооружения плохо справляются с удалением ПАВов. Поэтому вредные ПАВы возвращаются через водопровод к нам почти в той же концентрации, в которой мы их выливаем в сток. Исключение составляют только средства с биоразлагаемыми ПАВами.

Какие бывают ПАВы?

Анионные ПАВ. Основным достоинством является относительно невысокая стоимость, эффективность и хорошая растворимость. Но они наиболее агрессивны по отношению к организму человека.
- Катионные ПАВ. Обладают бактерицидным свойством.
- Неионогенные ПАВ. Основным достоинством является благоприятное действие на ткань и главное - 100% биоразлагаемость.
- Амфолитные ПАВ. В зависимости от среды (кислотность/щелочность) проявляют себя либо как катионные, либо как анионные ПАВы.

Как ПАВы влияют на окружающую среду?

Один из основных негативных эффектов ПАВ в окружающей среде - понижение поверхностного натяжения. Например в океане изменение поверхностного натяжения приводит к снижению показателя удерживания CO2 и кислорода в массе воды. А это негативно влияет на водную флору и фауну.

Кроме того, почти все ПАВ, используемые в промышленности и домашнем хозяйстве, попадая на частички земли, песка, глины, при нормальных условиях могут высвобождать ионы тяжёлых металлов, удерживаемые этими частичками, и тем самым повышать риск попадания данных веществ в организм человека.

Что такое биоразлагаемое ПАВ?

Одним из основных критериев экологической безопасности товаров бытовой химии является биоразлагаемость ПАВ, которые входят в их состав. ПАВ делятся на те, которые быстро разрушаются в окружающей среде и те, которые не разрушаются и могут накапливаться в организмах в недопустимых концентрациях.

Причем различают первичную биоразлагаемость, которая подразумевает структурные изменения ПАВ микроорганизмами, приводящие к потере поверхностно-активных свойств, и полную биоразлагаемость - конечную биодеградацию ПАВ до диоксида углерода и воды. Только такие, полностью биоразлагаемые, ПАВ являются безопасными.

100% биоразлагаемостью обладают только некоторые неионогенные ПАВ, в первую очередь получаемые на основе биологического сырья, а не нефтепродуктов.

Био-ПАВ – что это такое?

В 1995 году компания ECOVER совместно с французской фирмой Agro-Industrie Recherches et Développements (ARD) принимали участие в европейском исследовательском проекте, целью которого было научиться синтезировать ПАВ из сельскохозяйственных отходов, например, соломы и пшеничных отрубей. Проект был успешно завершен еще в 1999 году, а производство в промышленных масштабах началось в 2008 году.

Сейчас био-ПАВ лежат в основе всей линейки средств для мытья посуды марки ECOVER. Результаты тестов подтверждают, что подобные ПАВ обладают сильным чистящим действием, полностью биоразлагаемы и характеризуются низкой токсичностью. Это похоже на сказку, в которой солома превращалась в золото, но здесь речь идет о реальной истории.

Индикаторы и измерители алкоголя в выдыхаемом воздухе и биологических жидкостях (кровь, моча, слюна)

Определение алкоголя в выдыхаемом воздухе согласно нормативным документам Минздрава России и Минздрава СССР является обязательной процедурой при медицинском освидетельствовании на состояние опьянения.

При медицинском освидетельствовании, поскольку оно входит в перечень мер обеспечения производства по делу об административном правонарушении, т.е. имеет юридическую силу, допускается использование только тех изделий и приборов, которые разрешены к применению в медицинской практике в установленном порядке.

В системе лабораторной диагностики различают предварительные (качественные, скрининговые) и подтверждающие (в отношении алкоголя - количественные) методы исследования. Предварительные методы могут применяться сотрудниками ГИБДД для решения вопроса о необходимости направления на медицинское освидетельствование, в ходе которого, как правило, используются подтверждающие (количественные) методы исследования. Приказом Минздравсоцразвития России от 10.01.2006 г. №1 предварительные методы индикации наличия алкоголя в выдыхаемом воздухе, наряду с подтверждающими (количественными) методами, разрешены к использованию при проведении медицинского освидетельствования.

Медицинские изделия для скринингового (предварительного) определения алкоголя в выдыхаемом воздухе, разрешенные для медицинского применения

Набор трубок индикаторных для контроля трезвости

Метод основан на реакции окисления этанола бихроматом калия (K 2 Cr 2 O 7) в присутствии концентрированной серной кислоты, известной как реакция Раппопорта-Архангеловой. При окислении молекул этанола ионы хрома со степенью окисления -6 восстанавливаются до степени окисления -3, в связи с чем желтый или оранжевый цвет реагентов меняется на зеленый. Реактивами (раствор хромового ангидрида в концентрированной серной кислоте) импрегнированы гранулы силикагеля, засыпанного в запаянную стеклянную трубку с насечками с обоих концов. При использовании концы трубки обламываются в месте насечек и через нее освидетельствуемый продувает выдыхаемый воздух. Изменение цвета, соответствующее количеству содержащегося в выдыхаемом воздухе этанола, оценивается визуально. Метод удобен и прост в использовании (порог обнаружения составляет 0,2 ‰), однако обладает существенным недостатком - неизбирательностью, поскольку сходным с этанолом редуцирующим действием обладает большой круг веществ. Так, окраска реагентов изменяется на зеленую под действием помимо этанола метанола, эфиров, ацетона (что особенно важно, если испытуемый страдает диабетом), альдегидов, сероводорода, а при действии бензина, скипидара, уксусной кислоты, камфары, фенола, дихлорэтана реагент приобретает коричневую окраску, что не позволяет выявить наличие этанола. В связи этим большой процент результатов, полученных с помощью этого метода, оказывается ложноположительным или ложноотрицательным.

Сигнализатор пороговый паров этанола «Lion Alcoblow»

Принцип работы тот же, что и у цифровых приборов для количественного определения алкоголя в выдыхаемом воздухе, производимых фирмой «Lion», однако бесконтактный выдох обеспечивает в этом случае лишь предварительный качественный результат. Чувствительность (0,1 ‰) вполне достаточна для выявления даже факта употребления алкоголя, ложноположительные результаты отсутствуют. Удобен в работе, т.к. не требует сменных стерильных мундштуков.

Многие современные модификации цифровых приборов для количественного анализа имеют в качестве дополнительного режима скрининговый, основанный на бесконтактном выдохе и используемый в качестве предварительного. В случае положительной реакции прибор автоматически переходит в режим количественного анализа. Такая система тестирования позволяет экономить время и сменные мундштуки.

Приборы для измерения количества (концентрации) алкоголя, разрешенные к применению в медицинской практике

В настоящее время выпускаются приборы с тремя различными принципами детекции.

Полупроводниковая хемосорбция. При прохождении содержащего пары этанола воздуха через камеру детектора молекулы этанола адсорбируются чувствительным слоем детектора, в результате чего меняется его сопротивление и, следовательно, сила проходящего через этот слой электрического тока. Эти изменения прямо пропорциональны количеству молекул этанола, проходящих через детектор. Примером применения полупроводникового детектора является анализатор Alert J4X (Канада).

Электрохимическая детекция - основана на процессе окисления-восстановления молекул спиртов на платиновых электродах при прохождении через них электрического тока. Такие детекторы избирательны, поскольку реагируют только на спирты и не дают ложноположительных результатов с другими летучими соединениями, обладают высокой чувствительностью и надежностью. Электрохимические детекторы являются дорогостоящими, однако широко распространены в мире. Ими оснащены анализаторы серии Lion Alcometer (S-D2, SD-400, SD400P, 500) (Великобритания), серии Alcotest (Германия) и серии Alco-Sensor IV (США). В последнее время появилась также модификация прибора Alert J4Xec, который снабжен электрохимическим детектором.

Спектроскопия в инфракрасном свете (ИК-спектроскопия). Детектор включает источник ИК-излучения, фокусирующую линзу, узкополосные светофильтры, высокочувствительный фотоэлемент. Анализатор Lion Intoxilyzer 8000 (Великобритания) использует три длины волны: 3,80, 3,38 и 3,39 мкм; Lion Intoxilyzer 8000 - две: 3,4 и 9,36 мкм; прибор АКПЭ-1 (Фирма МЕТА, Жигулевск, Россия) - только одну (3,4 мкм).

Другой важнейшей характеристикой детектора является его чувствительность. Порог достоверно определяемой концентрации этанола указан в инструкциях к каждому прибору. Для подтверждения диагноза «алкогольное опьянение» низкий порог чувствительности прибора не обязателен, т.к., в большинстве случаев, клинические признаки опьянения появляются при концентрации этанола выше 0,5%, однако, для подтверждения факта употребления алкоголя, что предусмотрено при проведении медицинского освидетельствования в ряде случаев, не связанных с вождением транспорта, важно выявление более низких концентраций.

При этом следует иметь в виду, что у приборов Lion Alcometer и Lion Intoxilyzer пороговая концентрация этанола составляет 0,5 ‰.

Наконец, важнейшими характеристиками приборов являются их стабильность и линейность, т.е. прямая пропорциональность сигнала детектора количеству поступившего этанола во всем диапазоне измеряемых концентраций. Эти параметры характеризуются коэффициентом вариации. Высокие значения коэффициента вариации характерны для прибора Alert J4X.

Наиболее стабильные результаты обнаруживает прибор Lion Intoxilyzer, оснащенный собственной системой термостатирования. Вполне удовлетворительные результаты в отношении линейности и стабильности дают приборы с электрохимическим детектором - Lion Alcometer и Alco-Sensor IV.

Примечание: приведенные в настоящем разделе изделия медицинского назначения и методы не являются исчерпывающим списком разрешенных к применению приборов и методов.

Методики проведения исследований выдыхаемого воздуха и биологических жидкостей на алкоголь с помощью технических средств. Оценка результатов.

Факторы, влияющие на достоверность результатов (помимо характеристик детектора)

Соотношение концентраций кровь / воздух

Целесообразность определения этанола в выдыхаемом воздухе обусловлена наличием прямой пропорциональной зависимости между концентрациями этанола в крови альвеолярных капилляров и альвеолярном воздухе, т.к. молекулы этанола свободно диффундируют через клеточные мембраны по градиенту концентраций. Разность уровней этанола в крови и воздухе связана с разностью плотностей этих сред и является, следовательно, величиной постоянной, равной, как считается в большинстве стран мира, 2100.

Фаза выдоха

Из сказанного выше ясно, что именно в воздухе альвеол наступает равновесие уровня этанола с уровнем в крови. В воздухе верхних дыхательных путей содержание этанола тем меньше, чем больше расстояние от альвеол легких. Эмпирически установлено, чтобы подвергнуть анализу именно порцию легочного воздуха необходимо сбросить 5 объемов мертвого пространства, составляющего примерно 150 мл, т.е. первые 750 мл воздуха анализу не подвергаются. Все современные приборы оснащены измерительными датчиками, позволяющими оценивать объем проходящего через них воздуха, и автоматически включают процесс анализа лишь после сброса определенного объема воздуха из верхних дыхательных путей.

Этанол, адсорбированный в полости рта

Хорошо известно, что этанол, адсорбированный слизистой оболочкой ротовой полости, обуславливает завышение результатов анализа выдыхаемого воздуха (а также слюны) в течение 10 - 20 минут. С этим связано требование повтора анализа выдыхаемого воздуха через 20 минут. Наличие адсорбированного этанола может быть следствием не только употребления спиртных напитков, но и минимальных количеств спиртосодержащих лекарств, что иногда случается в условиях, предшествующих медицинскому освидетельствованию.

В первые 2 минуты после употребления алкоголя (в том числе спиртосодержащих лекарственных средств), концентрация этанола в выдыхаемом воздухе может достигать максимально высоких для измерительных приборов значений, что никак не коррелирует с опьянением. Некоторые модели современных анализаторов позволяют выявлять присутствие этанола, адсорбированного на слизистой ротовой полости, по крутизне нарастания уровня этанола по мере выдоха.

Интерпретация результатов анализа выдыхаемого воздуха при диагностике алкогольного опьянения

Как отмечено выше, состояние опьянения вызывается воздействием этанола на ЦНС и выраженность клинических симптомов опьянения прямо зависит от концентрации этанола в мозге. Уровень этанола в органах, интенсивно снабжаемых кровью (мозг, легкие, почки) в наибольшей степени соответствует его уровню в артериальной крови. С этой точки зрения анализ выдыхаемого воздуха, показывающий содержание этанола в крови альвеолярных капилляров, более информативен, чем непосредственный анализ доступной крови (венозной или капиллярной).

Следует иметь в виду, что все ориентировочные данные по концентрации этанола в крови, рассчитаны для венозной, а не артериальной крови. Артериально-венозное соотношение концентраций непостоянно и зависит от кинетической фазы этанола, во время которой происходит отбор биопроб. Выраженность клинической симптоматики благодаря эффекту повышенной толерантности также зависит от кинетической фазы. Кроме того, стресс (нередкое явление в условиях медицинского освидетельствования) часто маскирует клинические признаки опьянения.

Методы скрининга на наркотические средства и психотропные вещества. Их характеристика и оценка результатов.

Анализ психоактивных веществ имеет некоторые специфические особенности, его целью является установление факта их присутствия и (или) употребления, т.е. имеет место судебно-правовая направленность.

В соответствии с требованиями надежности, достоверности и доказательности, предъявляемыми к результатам анализов, лабораторное исследование при этом должно состоять из двух этапов - предварительного (или так называемого скринингового исследования) и подтверждающего.

Таким образом, лабораторное исследование на наличие психоактивных веществ состоит из двух этапов:

1) предварительный анализ - различными иммунохимическими методами, методом тонкослойной хроматографии;

2) подтверждающий анализ, чаще всего на основе хромато-масс - спектрометрии, реже - газовой хроматографии или высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Предварительные или скрининговые методы просты, не требуют сложной пробоподготовки, большого затрата времени. Их назначение - выявление отрицательных проб, которые исключаются из дальнейшего анализа. Положительные пробы подлежат дальнейшему исследованию с помощью подтверждающих методов.

В настоящее время наибольшее распространение в химико-токсикологическом анализе при скрининговых исследованиях получили иммунохроматографический анализ (ИХА) на тест-полосках, поляризационный флуороиммуноанализ (ПФИА) и иммуноферментный анализ (ИФА).

Современные иммунохимические методы отличаются высокой чувствительностью, простотой и экспрессностью исполнения, одновременно позволяют анализировать большое число проб, не требуя дополнительной или специальной очистки пробы или ее концентрирования и поэтому удобны для скрининг-диагностики.

При получении положительного результата, т.е. когда концентрация психоактивного вещества превышает пороговую, требуется провести дальнейшее исследование образца мочи подтверждающими альтернативными методами.

При отрицательном результате не требуется проведения дальнейшего исследования на анализируемое соединение или группу веществ.

1. Иммунохимические методы анализа.

Современные иммунохимические методы анализа основаны на конкуренции между антигеном в исследуемом образце и меченым антигеном за ограниченное число мест связывания на специфических антителах. Иммунохимические методы имеют ряд преимуществ перед физико-химическими методами: достаточно малое количество образца на анализ, быстрота и простота выполнения, высокая чувствительность, практически отсутствует стадия пробоподготовки.

Все пробы, поступающие в химико-токсикологическую лабораторию, должны подвергаться предварительному иммунохимическому исследованию на основные группы исследуемых веществ, - чаще всего опиаты, амфетамины, каннабиноиды. При этом используются соответствующие наборы реагентов. Кроме того, при необходимости и по возможности может проводиться исследование и на другие группы или вещества: бензодиазепины, барбитураты, метадон, кокаин, фенциклидин, экстази, трициклические антидепрессанты. Для анализа этих веществ выпускаются соответствующие тест-полоски и иммунохимические наборы реагентов для различных анализаторов.

Применение общедоступных тест-систем, получивших в последнее время широкое распространение для диагностики употребления психоактивных веществ, расширяет возможности скрининговых исследований в лабораторной практике.

Иммунохроматографический анализ (ИХА) на тест-полосках

Достаточно большое распространение получил иммунохроматографический анализ, или так называемые тест-полоски, тест-системы, которые позволяют в течение 5-10 минут выявить прием психоактивных веществ и (или) их метаболитов в моче человека. На предварительном этапе такая быстрая и простая диагностика, не требующая дополнительного оборудования, реактивов и специальных навыков, может быть полезна в качестве вспомогательного скринингового метода. Тест-полоски не предназначены для определения количественного уровня психоактивных веществ в моче и не являются подтверждающим методом исследования.

Исследуемая моча за счет капиллярных сил мигрирует вдоль тест-полоски. При наличии в образце искомого психоактивного вещества или его метаболитов в концентрации, превышающей установленный для тест-полосок пороговый уровень, исследуемые соединения вступают в реакцию со специфическими антителами, мечеными частицами коллоидного золота, образуя комплекс антиген-антитело. Этот комплекс вступает в реакцию конкурентного связывания с антигеном, иммобилизованном в тест-зоне стрип-полоски, при этом образование цветной полосы окрашивания в тест-зоне не происходит. Такой результат расценивается как положительный.

При отсутствии искомого вещества или когда его концентрация меньше порогового значения, несвязанные меченые антитела связываются с иммобилизованным антигеном в тест-зоне стрип-полоски с образованием цветной полосы в этой зоне. Такой результат имеет отрицательное значение.

В контрольной зоне тест-полоски цветная полоса образуется всегда и служит контролем, что указывает на правильность проведения процедуры теста и работоспособность его компонентов.

Постановка анализа.

1. Все компоненты теста и образца мочи перед проведением анализа должны быть согреты до комнатной температуры.

2. Моча собирается в чистую сухую пластиковую или стеклянную посуду

3. Вскрывается упаковка тест-полоски вдоль прорези, не касаясь рабочей поверхности мембраны.

4. Извлекается полоска и погружается вертикально в мочу до уровня ограничительной линии на 30-60 сек.

5. Полоска извлекается из мочи и помещается на горизонтальную поверхность, через 5 минут определяется результат анализа.

Интерпретация результатов

Выявление двух полос розового цвета любой четкости и интенсивности окраски в тестовой и контрольной зоне свидетельствует, что в анализируемом образце мочи соответствующие искомые психоактивные вещества отсутствуют или их концентрация ниже порогового значения.

Выявление в контрольной зоне одной полосы розового цвета любой четкости и интенсивности и полное отсутствие второй полосы в тестовой зоне свидетельствует о наличии в анализируемом образце мочи соответствующего психоактивного вещества.

Если в течение 5 минут полосы не выявляются или появляется полоса на уровне тестовой зоны, результат не оценивается и тестирование повторяется с помощью новой тест-полоски.

Некоторые производители тест-полосок указывают о 100% достоверности анализа. Это не соответствует действительности, так как известны случаи получения ложноположительных результатов при применении тест-полосок.

Исходно иммунохроматографические тесты в медицинской диагностике предлагались ориентированными на минимальные манипуляции и качественную бесприборную регистрацию результатов как альтернативные сложным стационарным методам анализа.

При проведении скрининговых исследований с помощью тест-полосок необходимо четкое протоколирование результатов тестирования с отражением объективно регистрируемых данных. Объективизация оценки результатов исследования может быть обеспечена использованием отечественного рефлектометрического анализатора «Рефлеком» с программным обеспечением «Видеотест» для компьютера, в котором могут сохраняться регистрационные данные иммунохроматографического анализа. Использование фотометрической регистрирующей техники исключает при оценке результатов анализа элемент субъективности, позволяет сохранять результаты тестирования в виде как первичного документа (изображения тест-полоски), так и обработанных на компьютере данных, повышает производительность регистрации результатов анализа.

Иммунохроматографические экспресс-тесты (тест-полоски) выпускаются для выявления содержания в моче человека морфина (опиатов), амфетамина, метамфетамина, каннабиноидов, кокаина (бензоилэкгонина), метадона, фенциклидина, бензодиазепинов, барбитуратов, экстази, трициклических антидепрессантов. Выпускаются также мульти-тест-системы для одновременного выявления 2-х, 3-х, 5-и, 6-и видов психоактивных веществ.

Поляризационный флуороиммуноанализ (ПФИА)

Одним из самых перспективных на сегодняшний день разновидностей иммуноанализа является его гомогенный вариант - количественный (полуколичественный) метод ПФИА, в основу которого положен принцип конкуренции определяемого антигена и антигена, меченого флуоресцентной меткой связывания с антителами. Образование иммунокомплекса устанавливается путем измерения поляризации флуоресценции, которая возрастает при связывании меченого антигена с антителами. Обнаружение исследуемой группы психоактивных веществ проводится на уровне установленной пороговой концентрации (Cut-off), т.е. достоверно определяе-мой концентрации. Количественное определение проводится суммарное (как нативных соединений, так и метаболитов) по отношению к концентрации вещества, используемого в качестве стандартного образца сравнения.

Метод ПФИА - это экспрессный, точный и легко воспроизводимый гомогенный иммуноанализ, коэффициент вариации обычно не превышает 3% и который по чувствительности лишь немногим уступает ИФА. Позволяет определять в течение нескольких минут концентрацию анализируемого вещества в объеме пробы от 50 до 100 мкл с пределом детекции 10-50 нг/мл и пороговой концентрацией 25-300 нг/мл. Анализ проводится в автоматическом режиме на ТДх, FLх-анализаторах фирмы «Abbott» (США).

Фирмой «Abbott» выпускается около 20 различных видов наборов для определения различных веществ и (или) их метаболитов в моче и сыворотке крови: опиаты, амфетамин / метамфетамин, каннабиноиды, кокаина метаболит (бензоилэкгонин), фенциклидин, метадон, барбитураты, бензодиазепины, трициклические антидепрессанты, нортриптилин, пропоксифен, фенобарбитал, амитриптилин, дезипрамин, имипрамин, карбамазепин, этанол.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

В нашей стране нашли применение гетерогенные методы ИФА, использующие для выявления образующих специфических иммунокомплексов меченые антитела и антивидовые антитела. В методе используются иммобилизованные (за счет сорбции) на поверхности твердых носителей антигены с последующим специфическим связыванием анализируемого соединения на иммуносорбенте и выявлении образовавшихся иммунокомплексов.

Формирование иммуноспецифического комплекса проходит на твердой подложке. Преимущество твердофазного варианта ИФА - высокая специфичность и чувствительность, сопоставимая с хромато-масс-спектрометрией.

Детекция результатов исследования иммуноферментных методов проводится визуально или с использованием аппаратных комплексов для измерения оптической плотности растворов (вертикальные ридеры).

В настоящее время выпускаются готовые реагенты ИФА, позволяющие выявлять следующие основные вещества и группы веществ: опиаты, каннабиноиды, амфетамины, кокаин (бензоилэкгонин), бен-зодиазепины, фенобарбитал, фенциклидин, фентанил / триметилфентанил, клофелин.

Целесообразно применение таких ИФА тест-систем для анализа нетрадиционных биологических объектов: слюна, волосы, ногти.

2. Тонкослойная хроматография

Тонкослойная хроматография (ТСХ) в основном используется в качестве предварительного метода исследования, но может использоваться и как подтверждающий в сочетании с исследованием иммунохимическим методом.

Принцип ТСХ - физико-химические процессы, основанные на многократном повторении актов сорбции и десорбции вещества или группы веществ при перемещении их в составе подвижной фазы вдоль неподвижной фазы, в результате чего происходит формирование концентрационных зон веществ. При тонкослойной хроматографии несколько микролитров экстракта, полученного при пробоподготовке, помещается на линию старта пластинки (твердая подложка с нанесенным на нее тонким слоем сорбента). Хроматографическая пластинка помещается в герметически закрытую камеру, содержащую на дне смесь растворителей, называемой системой растворителей. Под действием капиллярных сил растворитель движется вдоль слоя сорбента и с разной скоростью переносит компоненты анализируемой смеси, что и приводит к их разделению. Концентрационные зоны формируются в виде круглых пятен. Визуализация осуществляется путем обработки пластинки хромогенными реагентами. Идентификация компонентов смеси осуществляется сравнением длины пробега вещества (Rf) с таковым значением вещества сравнения («метчика»).

Основными достоинствами метода тонкослойной хроматографии являются универсальность хроматографической системы, возможность визуально оценить полученное разделение, а поскольку компоненты образца остаются в слое сорбента имеется возможность разделения многих образцов на одной пластинке, что обуславливает малую стоимость анализа. Имеются и некоторые недостатки: ограниченная разрешающая способность из-за малой протяженности разделяющего участка, недостаточная чувствительность определения, зависимость результатов от окружающей среды.

Результаты хроматографического исследования необходимо подтверждать другими методами или использовать по крайней мере 2 разных метода исследования, например, ПФИА и ИХА.